Глинкина валерия владимировна рниму

История

Глинкина валерия владимировна рниму

В 1907 г. на медицинском факультете Московских Высших Женских Курсов (МВЖК) была создана кафедра гистологии, которая разместилась в одном здании с кафедрами зоологии и ботаники в Мерзляковском переулке.

Основателем и первым заведующим кафедрой был профессор Михаил Михайлович Гарднер – один из организаторов МВЖК, широко образованный врач и гистолог. Для чтения курсов лекций по цитологии и строению тканей был приглашён из Московского Университета профессор И.В.Огнев, а частную гистологию читал сам профессор М.М.

Гарднер, первыми преподавателями гистологии были также М.Н.Розанова-Ляховецкая (доцент) и Н.ГЛогинович-Миллер (ассистент), которые посвятили кафедре почти 50 лет.

В 1925 г. кафедру возглавил Владимир Порфирьевич Карпов – воспитанник профессора И.Ф.Огнева. В.П.Карпов был одним из первых русских исследователей, изучавших деление клеточного ядра. В.П.

Карпов – автор краткого учебника по гистологии, выдержавшего 7 изданий. В 30-е годы на кафедре работали также ассистент Б.Н.Колоссовский (впоследствии известный морфолог, академик АМН СССР), Н.Н.Кузнецов, доцент М.А.

Барон, исполнявший некоторое время обязанности заведующего кафедрой (впоследствии – член-корреспондент АМН СССР).

В 1934 г. кафедру возглавил виднейший советский нейрогистолог, ученик профессора Н.А.Миславского – член-корреспондент АН СССР, профессор Борис Иннокентьевич Лаврентьев. К моменту прихода на кафедру Б.И.Лаврентьев уже был признанным лидером советской нейрогистологии.

Будучи воспитанником знаменитой казанской школы нейрогистологов, известной своим тесным творческим сотрудничеством с физиологическими школами, Б.И.Лаврентьев успешно продолжил и развил эти традиции на кафедре.

Великолепный аналитический ум и талант учёного способствовали получению новой важнейшей информации в области структурной организации вегетативной нервной системы и снискали широкую известность и авторитет Б.И.Лаврентьеву не только в стране, но и за рубежом.

Период руководства кафедрой Б.И.Лаврентьевым можно обозначить как поворотную веху в научной жизни коллектива кафедры, определившую её дальнейшую научную направленность.

Эти исследования внесли огромный вклад в развитие учения об автономной нервной системе и иннервации внутренних органов. Их результаты были широко опубликованы в монографиях «Морфология автономной нервной системы» (отмеченной в 1939 г.

Государственной премией) и «Морфология чувствительной иннервации внутренних органов» (1947).

С 1945 по 1960 гг. кафедрой гистологии заведовал член-корреспондент АН СССР, профессор Григорий Константинович Хрущев. Научно-исследовательская деятельность Г.К.

Хрущева была посвящена изучению гистофизиологии соединительной ткани и крови, роли лейкоцитов в восстановительных процессах тканей. За монографию «Роль лейкоцитов в восстановительных процессах в тканях» (1945) он был удостоен премии им. И.М. Мечникова. Г.К.

Хрущевым были поддержаны и развиты научное направление и лучшие традиции научной школы Б.И.Лаврентьева.

С 1960 г. кафедрой руководила профессор Татьяна Андреевна Григорьева.

Основы дальнейших научных изысканий коллектива кафедры были заложены в ее докторской диссертации «Иннервация кровеносных сосудов», материалы которой были переизданы в Великобритании и Японии. В период руководства кафедрой Т.А.

Григорьевой главные исследования велись в двух направлениях: продолжалось изучение особенностей иннервации внутренних органов и морфологии внутриорганных рефлекторных дуг, и исследовалась роль нервной системы в регуляции процессов развития органов и тканей.

В этот период был выполнен большой цикл диссертационных работ. В последний период своей деятельности Т.А.Григорьева включила в круг научных интересов кафедры исследование морфогенетических изменений в трансплантированных органах.

С 1968 г. кафедру возглавил профессор Юрий Константинович Елецкий, а через год в 1969 г. кафедра была разделена на две – кафедру лечебного факультета (зав. кафедрой – Ю.К.Елецкий) и кафедру педиатрического факультета (зав. кафедрой – О.В.Волкова).

Юрий Константинович Елецкий руководил кафедрой гистологии лечебного факультета  до 1991 гг. По его инициативе был организован ежегодный симпозиум под названием «Педагогические чтения», что оказало существенное влияние на оптимизацию учебного процесса в ВУЗе.

Деятельность кафедры в вышеуказанном направлении дважды была удостоена медалей ВДНХ СССР. Научная работа кафедры, возглавляемая Ю.К. Елецким, была направлена на изучение различных аспектов структуры и функции органов пищеварительной системы. Профессор Ю.К.

Елецкий в течение многих лет был членом редколлегии журнала «Архив анатомии, гистологии и эмбриологии», входил в состав президиума правления Всесоюзного общества анатомов, гистологов и эмбриологов (ВНОАГЭ), являлся председателем учебно-методического совета по морфологическим дисциплинам и членом центральной учебно-методической проблемной комиссии по преподаванию медико-биологических дисциплин при Минздраве СССР, был членом экспертной комиссии по медико-биологическим дисциплинам ВАК СССР.

С 1991 г. по 2011 г. кафедру гистологии лечебного факультета возглавляла профессор Татьяна Клеониковна Дубовая.

Она, сохраняя преемственность общего научного направления исследований, развила ряд оригинальных концептуальных направлений, в разработке которых участвовали не только сотрудники кафедры и ЦНИЛ РГМУ, но и исследователи других научных коллективов (Институт биологии развития РАН, НИИ канцерогенеза РОНЦ им. Н.Н.Блохина, Института химической физики РАН им. Н.Н.Семенова, НИИ физико-химической медицины, НИИ гастроэнтерологии РАМН). Активно проводились исследования, направленные на изучение роли нервной системы в регуляции деятельности органов пищеварительной системы, в регуляции межклеточных взаимодействий и биологических ритмов синтеза белка; особенностей ответной реакции печени на кровопотерю, действие канцерогенов и токсинов, частичную резекцию органа.

Кафедру гистологии и эмбриологии  педиатрического факультета с 1969 по 2013 гг. возглавляла Ольга Васильевна Волкова –  академик РАМН (по эмбриологии), Академик Международной Высшей школы и ряда международных академий, профессор, Заслуженный деятель науки РФ

О.В.Волкова придавала большое значение развитию и совершенствованию учебного процесса в русле профилизации преподавания гистологии и эмбриологии на педиатрических факультетах. Под руководством О.В.

Волковой были созданы первые программы по профилированному обучению гистологии и эмбриологии, изданы многочисленные учебные и методические пособия для преподавателей и студентов педиатрических факультетов медицинских ВУЗов. Коллективом была проделана огромнейшая работа по внедрению профилированного преподавания,  приготовлению  учебных препаратов и иллюстраций.

Кафедра явилась основателем профилированного преподавания  гистологии и эмбриологии на педиатрических факультетах медицинских ВУЗов России и ведущим специалистом в области общей и медицинской  эмбриологии.

В рамках проблемы раннего эмбриогенеза, сформировалось новое ведущее научное направление кафедры – «Прогенез и факторы его регуляции».

В 2013 г. кафедры гистологии, эмбриологии и цитологии лечебного и педиатрического факультетов были объединены и руководителем общей кафедры стала профессор, доктор медицинских наук Валерия Владимировна Глинкина, с 2011 года возглавлявшая кафедру гистологии, эмбриологии и цитологии лечебного факультета.

В настоящее время учебный процесс на кафедре полностью модернизирован и  соответствует уровню европейских медицинских университетов: все учебные аудитории оснащены мультимедийными системами; создан электронный банк изображений препаратов, который активно используется студентами наряду с обязательной индивидуальной работой с микроскопами и гистологическими препаратами; функционирует компьютерный класс; помимо традиционных используются электронные методические материалы для студентов. Внедрена двухуровневая система оценки знаний студентов.

В последние годы коллектив кафедры пополнился молодыми сотрудниками.

Активно проводятся научные исследования по следующим направлениям: закономерности морфогенеза, функции и регуляции деятельности органов репродуктивной сферы, состояние биологических механизмов обеспечения структурного гомеостаза в индивидуальном развитии и компенсация нарушенных функций, репаративная регенерация тканей и органов, изучение ультраструктурных особенностей клеток различных тканей человека в условиях адаптации к полисистемной митохондриальной недостаточности и тканевой гипоксии.

Источник: http://rsmu.ru/711.html

Способ диагностики врожденной немалиновой миопатии

Глинкина валерия владимировна рниму

Изобретение относится к медицине, в частности к неврологии, патологической анатомии, а также к гистологии, цитологии и клеточной биологии, и может быть использовано для диагностики немалиновой миопатии.

Немалиновая миопатия – один из вариантов врожденной непрогрессирующей миопатии, ассоциированный с “палочковидными” (“немалиновыми”) структурами в мышечных волокнах.

Дифференциальный диагноз на наличие различных форм немалиновой миопатии следует проводить с другими болезнями и синдромами, при которых наблюдается симптомокомплекс “вялого ребенка”, болезнью Краббе, хромосомными синдромами. Главной патоморфологической характеристикой немалиновой миопатии является наличие в мышечных волокнах скоплений т.н.

“палочковидных телец” или “палочек” (rod bodies). “Палочки” имеют 0,5-3 мкм в ширину и до 7 мкм в длину и располагаются субсарколеммально (Dubowitz V., Sewry С.А., Oldfors А. Muscle biopsy. Saunders Elsevier, 2013, p. 371-377).

Изменения, типичные для данной болезни, не могут быть установлены при гематоксилин-эозиновой окраске фиксированного в формалине и залитого в парафин материала.

Предпочтительнее фиксация в растворе Bouin или Zenker и последующая окраска фосфорно-вольфрамовой кислотой – эозином.

При окраске по Гомори-Энгелу палочковидные структуры окрашиваются в более темный зеленый цвет по сравнению с нормальными мышечными волокнами.

Известен способ морфологического выявления немалиновых телец посредством трансмиссионной электронной микроскопии (Morris Е.Р., Nneji G., and Squire J.M. The Three-dimensional Structure of the Nemaline Rod Z-Band. The Journal of Cell Biology, 1990; 111: 6: 2: 2961-2978).

Срезы толщиной около 80 нм из блоков мышечных биоптатов, залитых в аралдит, готовят на ультратоме как в поперечном, так и в продольном направлении. Анализ изображения проводят с помощью электронного микроскопа JEOL 1200ЕХ или аналогичного с гониометром и вращающимся держателем образцов.

Признаком немалиновой миопатии служит обнаружение продольных и поперечных срезов немалиновых телец, а также немалиноподобных утолщений Z-полосок.

Однако этот способ имеет недостатки: трудоемкость метода электронной микроскопии, повышенная частота как ложноотрицательных, так и ложноположительных ответов из-за малого поля зрения.

Известен другой способ морфологического выявления немалиновых телец, присутствующих в мышечных волокнах больных с врожденной немалиновой миопатией (Wallgren-Pettersson CI, Jasani В, Newman GR, Morris GE, Jones S, Singhrao S, Clarke A, Virtanen I, Holmberg C, Rapola J.

Alpha-actinin in nemaline bodies in congenital nemaline myopathy: immunological confirmation by light and electron microscopy. Neuromuscul Disord. 1995 Mar; 5 (2): 93-104). Изучают биоптаты мышц с использованием моноклональных антител к альфа-актинину в сочетании с модифицированным трехцветным методом Гомори.

Электронная и световая микроскопия используются для иммуногистохимического определения участков локализации альфа-актинина и десмина. При немалиновой миопатии световая микроскопия срезов при выявлении альфа-актинина показывает наличие поперечной исчерченности мышечных волокон, фокальное утолщение Z-полос и наличие немалиновых тел.

Электронная микроскопия подтверждает наличие альфа-актинина в немалиновых телах и Z-полосах. Результаты дают прямые доказательства наличия альфа-актининовых немалиновых тел.

Таким образом, морфологическая диагностика, обладающая значительно большей чувствительностью, чем молекулярно-генетическое исследование, тем не менее, остается чрезвычайно трудоемким и капризным методом выявления признаков немалиновой миопатии. В связи с этим чрезвычайно актуально расширение спектра морфологических методов, способных выявлять маркеры немалиновой миопатии.

Наиболее близким аналогом к патентуемому (прототипом) является способ выявления немалиновых телец с помощью окраски свежезамороженных срезов мышечной ткани по Гомори-Энгелу (Engel W.K., Cunningham G.G. – Rapid examination of muscle tissue: An improved trichrome stain method for fresh frozen biopsy sections. / Neurology, 1963, v. 13, p. 919-926).

Проводят морфологическое исследование мышечной ткани больных с врожденными миопатиями (в том числе немалиновой) – биоптаты мышц с использованием трехцветной окраски по Гомори, модифицированной для замороженных срезов мышечной ткани.

Готовят краситель, содержащий хромотроп 2R (600 мг), прочный зеленый FSF (300 мг), фосфорно-вольфрамовую кислоту (600 мг), ледяную уксусную кислоту (1 мл), дестиллированную воду (100 мл). Замороженные срезы предварительно окрашивают одним из квасцовых гематоксилинов по стандартной методике, промывают водой и окрашивают вышеуказанным красителем 60 минут при комнатной температуре.

Окрашенные срезы заключают под покровное стекло в глицерин-желатиновую смесь. При светомикроскопическом анализе немалиновые тельца видны в виде темно-зеленых палочковидных телец на светло-зеленом фоне саркоплазмы мышечных волокон.

Недостатком этого метода является необходимость использования только свежезамороженных срезов непосредственно после взятия мышечной биопсии, а также низкая чувствительность и высокая вероятность ложноотрицательных результатов.

Задачей изобретения является создание надежного и чувствительного морфологического метода диагностики врожденной немалиновой миопатии.

Техническим результатом является повышение надежности диагностики немалиновой миопатии за счет расширения технических возможностей исследования биоптатов скелетных поперечнополосатых мышц пациентов при использовании иммуногистохимического метода на парафиновых биопсийных препаратах.

Сущность изобретения заключается в следующем.

Для диагностики немалиновой миопатии у пациента с клинической картиной врожденной миопатии осуществляют забор биоптата скелетной поперечнополосатой мышечной ткани. Проводят иммуногистохимическое выявление фактора, индуцируемого гипоксией -1-альфа (HIF-1α).

Для чего готовят гистологические образцы-срезы, наносят на них усилитель флуоресцентного сигнала, далее на срезы наносят белок-блокатор, обеспечивая уменьшение фонового неспецифического окрашивания. Затем срезы инкубируют с поликлональными антителами кролика к белку HIF-1α.

После промывки наносят на срезы соответствующие вторичные флуоресцентные антитела, покрывают фотозащитным реагентом и исследуют с помощью люминесцентного микроскопа, а при выявлении локусов округлой и/или овальной формы красной окраски диаметром 3-5 мкм под оболочкой мышечного волокна диагностируют немалиновую миопатию.

Способ осуществляется следующим образом.

У больного с признаками врожденной миопатии с целью дифференциальной диагностики проводят иммуногистохимическое выявление фактора, индуцируемого гипоксией -1-альфа (HIF-1α).

Для этого после взятия мышечной биопсии проводят химическую фиксацию материала в 10% нейтральном (рН-7,4) забуференном формалине в течение 24 часов, после чего материал обезвоживают с использованием ксилола и заливают в парафин.

С парафиновых блоков получают срезы толщиной 4 мкм, которые наносят на высокоадгезивные стекла, а затем высушивают в течение 24 часов при температуре 48°С.

Срезы депарафинируют поочередно в трех порциях ксилола по 5 минут в каждом, регидрируют трехкратно в 96% спиртовых растворах по 5 минут в каждом, промывают в дистиллированной воде 3 раза по 5 минут. Затем на 30 минут на образцы наносят усилитель флуоресцентного сигнала (Image-iT FX signal enhancer, Thermo Fisher Scientific), с последующей промывкой в фосфатном буфере (PBS).

На следующем этапе на срезы на 30 минут наносят белок-блокатор (Novocastra Protein Block, Leica), для уменьшения фонового неспецифического окрашивания.

Затем срезы инкубируют во влажной камере в течение 60 минут при комнатной температуре с поликлональными антителами кролика к белку HIF-la (Thermo Fisher Scientific, США; разведение 1:100).

После чего срезы промывают в фосфатном буфере 3 раза по 5 минут и на 60 минут на них наносят соответствующие вторичные флуоресцентные антитела (антитела к поликлональным антителам кролика) (Антитела козы к IgG кролика (Alexa Fluor 555) Thermo Fisher Scientific, США, Разведение 1:2000). Затем срезы промывают в фосфатном буферном растворе 3 раза по 5 минут и покрывают фотозащитным реагентом ProLong Gold (страна производитель США) и заключают под покровные стекла.

При последующем анализе с помощью люминесцентного микроскопа при немалиновой миопатии в различных участках мышечных волокон (чаще непосредственно под оболочкой волокна) определяются ярко красные локусы. Их форма приближена к округлой или овальной. Диаметр: 3-5 мкм. При других формах врожденных миопатий такие локусы не обнаруживаются.

Для доказательств возможности реализации заявленного назначения и достижения указанного технического результата приводим следующие данные.

Клинический пример 1.

Пациенту 2 лет с клиникой врожденной миопатии проведено исследование скелетной мышечной ткани по предлагаемому способу. Приводим описание микрофотографии (Фиг. 1). Скелетная мышечная ткань, увеличение ×600. Иммуногистохимическое распределение флуоресцентного маркера HIF-1α (красный).

Определяются выраженные скопления маркера HIF-1α под оболочкой мышечного волокна (на периферии мышечных волокон) в виде четко очерченных кластеров. Диагностирована немалиновая миопатия. При исследовании биоптата скелетных мышц, окрашенного по методу Гомори, диагноз был верифицирован.

Клинический пример 2.

Пациенту 4 лет с клиникой врожденной миопатии проведено исследование скелетной мышечной ткани по предлагаемому способу. Приводим описание микрофотографии (Фиг. 2).

Иммуногистохимическое распределение флуоресцентных маркеров наружной митохондриальной мембраны (зеленый) и HIF-1α (красный). Увеличение ×400. Определяются множественные локусы интенсивной флуоресценции маркера HIF-1α. Диагностирована немалиновая миопатия.

При исследовании биоптата скелетных мышц, окрашенного по методу Гомори, диагноз был верифицирован.

Способ диагностики немалиновой миопатии, при котором у пациента с клинической картиной врожденной миопатии осуществляют забор биоптата скелетной поперечнополосатой мышечной ткани, проводят иммуногистохимическое выявление фактора, индуцируемого гипоксией -1-альфа (HIF-1α), для чего готовят гистологические образцы-срезы, наносят на них усилитель флуоресцентного сигнала, далее на срезы наносят белок-блокатор для уменьшения фонового неспецифического окрашивания, затем срезы инкубируют с поликлональными антителами кролика к белку HIF-1α, после промывки наносят на срезы соответствующие вторичные флуоресцентные антитела, покрывают фотозащитным реагентом и проводят люминесцентную микроскопию, а при выявлении локусов округлой и/или овальной формы красной окраски диаметром 3-5 мкм под оболочкой мышечного волокна диагностируют немалиновую миопатию.

Источник: https://edrid.ru/rid/218.016.05f2.html

ЗнайПрава
Добавить комментарий